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何首乌饮对D-半乳糖所致衰老大鼠下颌下腺β-半乳糖苷酶表达的影响

时间:2018-11-05 10:42 文章来源:http://www.lunwenbuluo.com 作者:李俊玫 , 高福禄 , 点击次数:

    【摘要】 目的 通过观察何首乌饮干预的衰老大鼠下颌下腺β?半乳糖苷酶(β?gal)表达的改变,探讨何首乌饮的抗衰老作用。方法 用D?半乳糖制造衰老大鼠模型,何首乌饮的干预作用分治疗和预防两部分,检测β?半乳糖苷酶活性,观察下颌下腺衰老细胞数目改变。结果 预防性实验部分:模型组衰老细胞数目多于正常组和各预防性用药组;治疗性实验部分:用药各组与自然恢复组相比,衰老细胞数目明显减少,其中治疗中剂量组最低。结论 何首乌饮具有抗模型大鼠下颌下腺细胞衰老的作用。
  【关键词】 何首乌;D?半乳糖;衰老大鼠;下颌下腺;β?半乳糖苷酶
    衰老是在生物发育成熟后,随年龄的增加,机体的器官、组织出现功能、形态的退变乃至老化的过程。下颌下腺是具有外分泌和内分泌双重功能的腺体,能够分泌70%的唾液和近50种生物活性物质,其分泌的某些生物活性物质完全达到激素水平,对机体多种组织、器官有重要的支持、营养及调节作用。近年来,关于下颌下腺功能的研究逐渐深入,但对其衰老与抗衰老的研究却少有报道。本实验采用D?半乳糖诱发的亚急性衰老模型,通过对β?半乳糖苷酶活性的检测,观察下颌下腺衰老细胞数目的改变;探讨何首乌饮对衰老大鼠下颌下腺的影响,为何首乌饮在延缓组织退行性改变、增强老年性保健、预防衰老性涎腺疾病方面奠定研究基础。
  1  材料与方法
  1.1  材料与仪器
  何首乌饮方剂由炙何首乌、怀牛膝、肉苁蓉、淫羊藿、丹参、茯苓组成,由本院贾春华教授提供;实验大鼠购自河北省实验动物中心,合格证编号:605106。
  1.2  实验动物的选择及分组
  选用8周龄清洁级SD雌性大鼠90只,体重180~220 g,随机分为预防性和治疗性两大实验部分,每部分5组,每组9只。
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  1.3  模型的建立及各组动物的处理方法
  预防性用药部分:正常组(N)大鼠正常喂60 d;模型组(M)大鼠腹腔注射D?半乳糖(300 mg·kg-1·d-1),连续 60 d;何首乌饮(H
  SWY)预防高(Ph)、中(Pm)、低 (Pl) 剂量组大鼠腹腔注射D?半乳糖的同时分别灌胃何首乌饮(3.872,1.936,0.968 g·100 g-1·d-1,水煎浓缩成0.6 ml·100 g-1·d-1),每天1次,连续60 d。治疗性用药部分:阴性对照组(NC)大鼠按0.5 ml·100 g-1·d-1腹腔注射生理盐水,连续60 d后灌胃生理盐水0.6 ml·100 g-1·d-1,连续60 d。自然恢复组(S?R)大鼠腹腔注射D?半乳糖,连续60 d后正常喂养60 d。HSWY治疗高(Th)、中(Tm)、低(Tl)剂量组大鼠腹腔注射D?半乳糖,连续60 d后分别灌胃何首乌饮(剂量同上),每天1次,连续60 d。
  1.4  新鲜标本的取材
  各组大鼠末次给药后1 h,10%水合氯醛(0.3 ml/100 mg)腹腔注射麻醉,剪开颈部皮肤,分离并摘取下颌下腺,置液氮中保存备用。
  1.5  组织衰老特异性β?
  半乳糖苷酶冰冻切片的制备及染色  准备厚为10 μm的冰冻切片,按照试剂说明书的要求,操作完成后封片即刻在光学显微镜下观察和计数,表达β?半乳糖苷酶活性的地方呈蓝色,每组取3张切片,每张切片随机观察3个视野,计算视野中每100个细胞中阳性细胞率。
  1.6  统计学方法
  资料分析采用SPSS11.0统计软件完成。计量资料描述采用x±s,组间比较行单因素方差分析,组间多重比较用SNK?q检验。
  2  结果代理发表论文
  β?半乳糖苷酶检测显示胞浆呈深蓝色者为阳性细胞(图1),表明细胞处于衰老状态。方差分析结果显示,预防性实验部分的组间β?半乳糖苷酶表达,M组衰老细胞数目多于N组和各预防性用药组,差异有统计学意义(P<0.01);治疗性实验部分的组间β?半乳糖苷酶表达,用药各组与S?R组相比,衰老细胞数目明显减少(P<0.01),其中Tm组最低差异有统计学意义(P<0.01),见表1。表1  预防组及治疗组大鼠下颌下腺β?半乳糖苷酶的表达(略)
  3  讨论
  1995年,Dimiri等〔1〕发现体外培养的人二倍体成纤维细胞在pH为6时,β?半乳糖苷酶染色的阳性率随代龄增加而增加,因此他们把这种中性β?半乳糖苷酶,定义为衰老相关的β?半乳糖苷酶。并提出这种中性β? 半乳糖苷酶是一种很好的可用于体内外衰老研究的生物学标志。1999年,Pendergrass〔2〕对不同年龄恒河猴的皮肤组织切片进行衰老相关β?半乳糖苷酶染色检测,发现其阳性率有随龄增加的趋势。本研究应用冰冻切片检测β?半乳糖苷酶在下颌下腺表达的改变。发现HSWY作用后,与模型组相比,衰老细胞数目明显减少,延缓了衰老细胞群体死亡的发生,从而延长了细胞的生存时间。
  传统的中医学认为,脾肾亏虚夹瘀是衰老的基本病机,作用于衰老的全部过程,因而以补肾健脾,活血化瘀为治法预防及延缓衰老,标本兼治,使补正不敛邪,祛邪不伤正,从而达到防衰老的效果。HSWY由《宣明论方》何首乌正丸加味而成,正是通过补肾(炙何首乌、怀牛膝、肉苁蓉、淫羊藿),补脾(茯苓),活血化瘀(丹参)药物而达到补肝肾、兼健脾活血化瘀、延年益寿之功效〔3,4〕。医学研究表明,HSWY配方中的6味草药均为常用的抗衰老药物,具有明显的抗衰老作用,本实验结果亦证实其具有抗下颌下腺细胞衰老的作用,但尚不能解释其机制。
  参考文献: 
   1 Dimiri GP,Lee X,Basile G,et al.A biomarker that identifies senescent human cells in culture and in aging skin in vivo〔J〕.Proc Natl Acad Sci USA,1995;92(1):93?6.代理发表论文
  2 Pendergrass WR,Lane MA,Bodkin NL,et al.Cellular proliferation potential during aging and caloric restration in rhesus monkeys〔J〕.J Cell Phsiol,1999;180(1):123?30.
  3 谭颖然.何首乌的抗衰老作用机制探讨〔J〕.湖南中医药导报,2004;10(3):73?4.
  4 罗瑞芝,贾维,赵利斌,等.何首乌研究进展〔J〕.中草药,2005;36(7):1097?100.

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