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　　3. 讨论
　　本实验室前期的研究工作已经证实, 启膈散水煎剂和醇提物在体内外均能抑制食管癌细胞生长, 并能够诱导其凋亡 [2]。 虽然用量较大，但仍可以说明启膈散具有显著的抗肿瘤作用。为了提高药物抑制肿瘤效果，并进一步明确启膈散抗肿瘤的分子机制，本研究进行了分部位提取，观察启膈散乙酸乙酯部位对高表达STAT3的食管癌细胞Eca109的影响，以探讨启膈散乙酸乙酯部位发挥其抑制细胞增殖并诱导凋亡的分子机制。
　　本研究结果显示，不同浓度启膈散提取物作用Eca109细胞48小时后可以明显抑制细胞的增殖，且随药物浓度的增加而升高，呈剂量-效应依赖关系，半数抑制率为33.26 μg / ml，其抑制作用明显高于水煎剂[2,8]，说明启膈散水溶成分和酯溶成分都有一定抑制食管癌增殖6
　　作用，但酯溶成分作用更强。
　　细胞的无限制增殖而不易死亡是癌的特性之一，其中细胞凋亡是死亡的主要形式，但是肿瘤细胞通过多种策略可以减弱或绕过凋亡，比如抗凋亡调节因子表达量的增加在肿瘤发展成为高恶性及耐受治疗过程中起重要作用[9]。已发现许多天然药物提取物可通过干预细胞凋亡起到治疗作用[10]。为了进一步研究启膈散提取物抑制食管癌细胞增殖机制，我们检测了该方乙酸乙酯部位对细胞凋亡的影响，研究结果显示，启膈散乙酸乙酯部位可以诱导食管癌Eca109 细胞凋亡，且有剂量依赖性。
　　STAT3 是细胞感受多个生长因子和细胞因子后激活的重要生物信号，调节许多与肿瘤增殖、生长、浸润、转移、免疫逃逸、血管生成密切相关的靶基因转录，它可以上调抗凋亡基因BCL-XL，MCL，Survivin，而下调p53 基因，是公认的癌基因，在癌症治疗中很有研究价值的干扰作用靶点。Bcl-2 和caspase9 是两个重要的凋亡调节因子，Bcl-2 能够阻止细胞色素c 从线粒体释放到细胞质，从而抑制细胞凋亡；而caspase9 是凋亡起始蛋白，受细胞色c 与Apaf-1 复合物的激活，从而启动凋亡[4, 5,11-13]。
　　本研究发现启膈散作用细胞 48 小时， westernblot 检测结果显示STAT3:和Bcl-2 的表达量明显降低,， caspase9 的表达量明显升高，说明启膈散可抑制Eca109 细胞中STAT3 的表达，又因STAT3 是Bcl-2 的转录因子，所以Bcl-2 随着STAT3 表达量的降低而降低，Bcl-2表达量的降低，又通过线粒体途径激活caspase9，使caspase9 的表达量升高，进一步诱导食管癌Eca109 细胞凋亡。这一结果表明启膈散乙酸乙酯提取物能够抑制Eca109 细胞中STAT3信号通路，介导细胞凋亡，提示该物质可作为STAT3 信号抑制剂和抗肿瘤药物, 具有良好的开发前景。关于启膈散抑制STAT3 信号通路的作用位点及其体内抑瘤机制正在研究中。
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